Презентация Ильенко В.А.



  • ВЛИЯНИЕ ФИТОАДАПТОГЕНА НА ЛЕЙКОЦИТАРНЫЕ ИНТЕГРИНЫ ПРИ СПОНТАННОМ КАНЦЕРОГЕНЕЗЕ У МЫШЕЙ

  • Нарушение межклеточной адгезии многие авторы считают специфическим свойством опухолевого процесса. Показано, что недостаточность гистонеспецифических молекул адгезии на мембранах опухолевых клеток индуцирует в том числе снижение экспрессии соответствующих лейкоцитарных интегринов, что приводит к ослаблению их взаимодействий, сводя к минимуму элиминацию клеток-мишеней макрофагами, нейтрофилами, натуральными киллерами, цитотоксическими лимфоцитами. Это вносит определенный вклад в экранирование опухоли от иммунологического надзора.

    Вместе с тем благодаря исследованиям последних 40 лет стало очевидно, что медиаторами сложных взаимоотношений между иммунной системой организма и растущей опухолью являются цитокины – биологически активные вещества пептидной природы, регулирующие широкий спектр процессов, протекающих в организме. Выявлено, что цитокины, ассоциируясь с мембранами синтезирующих их клеток, обладают полным спектром биологической активности и проявляют его лишь при межклеточном контакте

    Таким образом, особенности ингибирования цитолитических потенций в отношении опухолевых клеток иммунных эффекторов (Т-лимфоцитов, макрофагов, натуральных киллеров, нейтрофилов и др.) нуждаются не только в нарушении рецепторного ансамбля, отвечающего за формирование конъюгатов с клеточными мишенями, но и требуют обязательного цитокинового сопровождения.

    В связи с этим, вероятно, нарушение регуляции адгезионных механизмов с участием сигнальной реакционности цитокинов при опухолевом процессе, может нуждаться в соответствующей коррекции препаратами с адгезиогенным действием.

  • Цель исследования: изучение нарушений экспрессии лейкоцитарных интегринов при опухолевом процессе на примере мышей, генетически предрасположенных к развитию гепатокарцином, а также значимости её коррекции комплексным фитоадаптогеном для развития опухолевого процесса

  • Задачи исследования:

    Изучение профилактического и лечебного воздействия комплексного фитоадаптогена на экспрессию лейкоцитарных интегринов в онтогенезе мышей-самцов линии СВА, генетически предрасположенных к возникновению гепатокарцином

    Исследование возможности коррекции комплексным фитоадаптогеном сывороточного уровня ИЛ-6 и -10 при спонтанном гепатоканцерогенезе экспериментальных животных в профилактическом и лечебном режимах введения

    Определение профилактического и лечебного воздействия комплексного фитоадаптогена на частоту возникновения и скорость роста гепатокарцином у мышей, предрасположенных к развитию данных опухолей

    Анализ возможности и характера патоморфологических изменений в спонтанных гепатомах мышей СВА при воздействии комплексного фитоадаптогена

    Изучение воздействия комплексного фитоадаптогена на соматическое состояние (характер шёрстного покрова, двигательная активность) и продолжительность жизни мышей высокогепатомной линии

  • Фитомикс-40

    - комплексный фитоадаптоген. Обладает адгезиогенным действием. Содержит компоненты экстрактов сорока растений, в том числе адаптогены. Состав защищён патентом РФ. Стандартизован, сертифицирован в качестве парафармацевтика. Проявляет антиоксидантные, антимутагенные, иммуномодулирующие, в том числе адгезиогенные и интерфеоногенные свойства, обладает противоопухолевым действием.


  • ВОЗДЕЙСТВИЕ ФИТОМИКСА-40 ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ ВВЕДЕНИЯ НА ЭКСПРЕССИЮ CD11a АНТИГЕНА ЛИМФОЦИТАМИ КРОВИ У МЫШЕЙ ВЫСОКОГЕПАТОМНОЙ ЛИНИИ СВА В ОНТОГЕНЕЗЕ

    Результаты работы показали, что у мышей-самцов линии СВА, предрасположенных к возникновению спонтанных гепатом, в зрелом периоде, т.е. в возрасте 4-х и 8-ми мес, число клеток крови, экспрессирующих лейкоцитарный интегрин LFA-1, или CD11a в контрольной группе, практически одинаково. В возрасте 22 мес этот показатель у животных снижается до уровня 35,3±1,6%.

    У мышей, которым в течение первого месяца жизни с питьевой водой вводили ФМ-40 (группа 2), изучаемый показатель к 22-м месяцам снижается в меньшей степени и статистически не значимо в сравнении с таким же периодом онтогенеза у контрольных мышей.

    Введение препарата вместе с питьевой водой мышам, начиная с шестимесячного возраста постнатального онтогенеза (группа 3), к 22-м мес выявило достоверное повышение данного показателя в сравнении с контролем.

  • ВОЗДЕЙСТВИЕ ФИТОМИКСА-40 ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ ВВЕДЕНИЯ НА ЭКСПРЕССИЮ CD11b АНТИГЕНА ЛИМФОЦИТАМИ КРОВИ У МЫШЕЙ ВЫСОКОГЕПАТОМНОЙ ЛИНИИ СВА В ОНТОГЕНЕЗЕ

    Также было показано, что в контрольной группе количество мононуклеаров крови мышей линии СВА, экспрессирующих лейкоцитарный интегрин Mac-1, или CD11b, в онтогенезе к возрасту 22-х месяцев достоверно подавляется до 7,8±1,0%.

    У опытных мышей 2-й группы изучаемый показатель в позднем онтогенезе отставал от уровня контроля в этом возрасте.

    В 3-ей группе в позднем онтогенезе параметр статистически значимо превышал цифру в группе контроля.

  • УРОВЕНЬ СЫВОРОТОЧНОГО ИЛ-6 У МЫШЕЙ ВЫСОКОГЕПАТОМНОЙ ЛИНИИ СВА В ОНТОГЕНЕЗЕ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ РАЗНЫХ СХЕМ ВВЕДЕНИЯ ФИТОМИКСА-40

    Вместе с тем в 1-й группе у контрольных животных концентрация ИЛ-6 в сыворотке крови к 22-х месячному возрасту достоверно возрастает.

    У опытных мышей (2-я группа) сывороточный уровень ИЛ-6 к 22-х месячному возрасту достоверно возрос, отставая в своём значении от контрольной группы.

    В 3-ей группе животных содержание сывороточного ИЛ-6 к 22 мес повышается, тем не менее достоверно не достигая контрольных значений в этом возрасте.

  • СЫВОРОТОЧНЫЙ УРОВЕНЬ ИЛ-10 У МЫШЕЙ ВЫСОКОРАКОВОЙ ЛИНИИ СВА В ОНТОГЕНЕЗЕ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ РАЗНЫХ СХЕМ ВВЕДЕНИЯ ФИТОМИКСА-40

    Кроме того, выявлено, что сывороточная концентрация ИЛ-10 у контрольных животных (1-я группа) в постнатальном онтогенезе растет. В возрасте 22 мес показатель ИЛ-10 достоверно увеличился.

    У опытных мышей, во второй группе, которым в раннем постнатальном онтогенезе вводили комплексный фитоадаптоген ФМ-40, содержание ИЛ-10 в позднем онтогенезе увеличивается, но не достигает контрольных значений.

    У мышей 3-ей группы при долговременном применении препарата с 6-ти месячного возраста динамика показателя ИЛ-10 аналогична таковой для 2-й группы. Вместе с тем выявлено, что содержание ИЛ-10 к возрасту 22 мес достоверно отстаёт от контрольного уровня. Таким образом, применение комплексного фитоадаптогена на фоне возникающих спонтанных опухолей, т.е. в лечебном режиме, также может способствовать подавлению сывороточной концентрации ИЛ-10.

  • ВОЗДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСНОГО ФИТОАДАПТОГЕНА ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ ВВЕДЕНИЯ НА ЧАСТОТУ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И РАЗМЕРЫ СПОНТАННЫХ ГЕПАТОМ У МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 22 МЕС

    Результаты работы также показали, что в контрольной группе мышей в возрасте 22 мес опухоли выявлены у всех животных, т.е. частота возникновения опухолей составляет 100%. Число опухолей на мышь составило 2,7 ± 0,3, а средний объём одной опухоли - 383,5 ± 78,0 мм3. При этом величина опухолевой массы в среднем у одного животного была равна 1043,1±230,0 мм3.

    У животных опытной группы (2), принимавших препарат профилактически в течение первого месяца постнатального онтогенеза, включая период завершения дифференцировки ткани печени, опухоли возникали реже - в 69,2% случаев. При этом количество гепатом на мышь и общий объём опухолей у одного животного оказались достоверно ниже, чем в контроле (P1-2 ≤0,001; P1-2 = 0,042).

    В третьей группе животных, которым вводили препарат с шестимесячного возраста постнатального онтогенеза продолжительно в лечебном режиме, число животных с гепатомами сравнимо со второй (опытной) группой. Вместе с тем число опухолей на мышь (1,6 ± 0,2) сравнимо с группой контроля. Однако общий объём опухолей на мышь в сравнении с контролем (185,1±67,4) снизился статистически достоверно (P1-3 = 0,026).

  • ВОЗДЕЙСТВИЕ ФМ-40 НА РАЗМЕРЫ СПОНТАННЫХ ГЕПАТОМ МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 22 МЕС.

  • ТРАБЕКУЛЯРНО-АЦИНАРНЫЕ ГЕПАТОКАРЦИНОМЫ НИЗКОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ КОНТРОЛЬНЫХ МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 22-Х МЕСЯЦЕВ (УВ. Х 400, ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ И ЭОЗИНОМ

    На рисунках представлены низкодифференцированные трабекулярно-ацинарные гепатокарциномы, т.е. опухоли смешанного строения, которых мы наблюдали в возрасте 22 мес в печени у высокораковых мышей-самцов линии СВА.

  • НОРМАЛЬНАЯ ТКАНЬ ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 22-Х МЕС, ПРИНИМАВШИХ ФМ-40 В ТЕЧЕНИЕ ПЕРВОГО МЕСЯЦА ЖИЗНИ (ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ И ЭОЗИНОМ, УВ. Х 400)

    Для сравнения можно привести участок нормальной ткани печени мышей СВА в этом возрасте.

  • ГЕПАТОКАРЦИНОМЫ, ИНФИЛЬТРИРОВАННЫЕ ЛИМФОЦИТАМИ, МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 22-Х МЕС, ПРИНИМАВШИХ ФМ-40 В ТЕЧЕНИЕ ПЕРВОГО МЕСЯЦА ЖИЗНИ (ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ И ЭОЗИНОМ, УВ.400)

    На слайде представлен гистологический препарат гепатокарциномы мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в течение первого месяца постнатального онтогенеза. Видно, что в данном случае гепатокарцинома инфильтрирована массой лимфоцитов.

  • Также на данном слайде представлен гистологический препарат гепатокарциномы мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в течение первого месяца постнатального онтогенеза

  • Также на данном слайде представлен гистологический препарат гепатокарциномы мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в течение первого месяца постнатального онтогенеза

  • Также на данном слайде представлен гистологический препарат гепатокарциномы мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в течение первого месяца постнатального онтогенеза

  • ТРАБЕКУЛЯРНО-АЦИНАРНЫЕ ГЕПАТОКАРЦИНОМЫ, ИНФИЛЬТРИРОВАННЫЕ ЛИМФОЦИТАМИ, МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 22-Х МЕС, ПРИНИМАВШИХ ФМ-40 С ШЕСТИМЕСЯЧНОГО ВОЗРАСТА ПОСТНАТАЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА В (ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ И ЭОЗИНОМ, УВ.400)

    На данном слайде продемонстрирована ткань опухоли печени мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в лечебном режиме с шестимесячного возраста постнатального онтогенеза. Опухоль также можно оценить как трабекулярно-ацинарную гепатокарциному. Слева просматривается край некротического участка опухоли. Здесь также наблюдается инфильтрация гепатокарциномы лимфоцитами. Кроме того, лимфоциты визуализируются в пределах зоны некроза. Участки некроза, окруженные лимфоцитами, выглядят деструктивными

  • Также на слайде продемонстрирована ткань опухоли печени мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в лечебном режиме с шестимесячного возраста постнатального онтогенеза

  • Также на слайде продемонстрирована ткань опухоли печени мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в лечебном режиме с шестимесячного возраста постнатального онтогенеза

  • Также на слайде продемонстрирована ткань опухоли печени мышей линии СВА в возрасте 22-х мес, принимавших ФМ-40 в лечебном режиме с шестимесячного возраста постнатального онтогенеза

  • КРИВЫЕ ВЫЖИВАЕМОСТИ МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ ВВЕДЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО ФИТОАДАПТОГЕНА

    На данном рисунки показаны кривые выживаемости мышей-самцов линии СВА, построенные по методу Каплан-Майера, при разных схемах введения комплексного фитоадаптогена.

  • ВЫЖИВАЕМОСТЬ ВЫСОКОГЕПАТОМНЫХ МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ ВВЕДЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО ФИТОАДАПТОГЕНА

    Средняя продолжительность жизни мышей в контроле, т.е. при спонтанном гепатоканцерогенезе составила 671,2 дня (22,0 мес). При введении комплексного фитоадаптогена в профилактическом режиме (в течение первого месяца постнатального онтогенеза, примерно, за пять месяцев до возникновения гепатом) выживаемость животных увеличилась до 769 дней (25,6 мес). Таким образом, разница в выживаемости мышей между первой и второй группой оказалась 98 дней. Этот же показатель в группе 3 (введение препарата минуя «критический» период дифференцировки печени, с шестимесячного возраста и на протяжении дальнейшего онтогенеза, лечебный режим введения) оказался 859,2 дня (28,2 мес). Следовательно, мыши 3-ей группы жили более длительно по сравнению с контрольной группы на 188 дней.

  • При этом медиана выживаемости животных 1-й (контрольной) группы составляет 643 дня. Этот же показатель в опытных группах равен 789 (2-я группа) и 859 дней (3-я группа). Таким образом, разница по этому показателю между 1-й и 2-й группой составляет 146 дней (4,8 мес), в то время как между 1-й и 3-ей – 216 дней (7,1 мес).

    Вместе с тем на представленных графиках можно проследить, сколько экспериментальных мышей пережило 900 (около 30 мес) и 1000 (около 33 мес) дней. Для 1(контрольной) группы эти показатели составили 9,5% и 0% соответственно. В профилактической группе (группа 2) указанные сроки пережили 16,7% и 2,0% мышей. Выживаемость животных лечебной группы (3) в данном случае равняется 40% и 17,5% соответственно.

    Можно также отметить, что самые высокие показатели выживаемости в опытных группах 2 и 3 составили 1038 дней (34 мес, 4 дня) и 1099 дней (36 мес) соответственно. В то же время в контрольной группе (1) максимальная продолжительность жизни мышей оказалась равной 990 дней (32 мес). Самая низкая выживаемость в опытных группах 2 и 3 была зафиксирована на уровне 488 дней (16 мес) и 567 дней (18 мес, 19 дней) соответственно. В контрольной группе минимальная продолжительность жизни отмечена на уровне 437 дней (14 мес, 9 дней).

  • ПАРАМЕТРЫ ДВИГАТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ У МЫШЕЙ ЛИНИИ CBA В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ ПОСЛЕ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ ФИТОМИКСА-40 ПРИ РАЗНЫХ РЕЖИМАХ ВВЕДЕНИЯ

    Что касается двигательной активности, в основном большинстве достоверных отличий между группами по всем изученным показателям мы не получили. Иными словами, более старые животные опытных групп 2 и 3, которые принимали ФМ-40 профилактически (в первый месяц постнатального онтогенеза, кратковременно) либо в лечебном варианте (с шестого месяца постнатального онтогенеза, продолжительно) по двигательной активности практически не уступали более молодым (на шесть-семь месяцев) контрольным мышам.

  • ВЕС МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА (В ГРАММАХ) В ВОЗРАСТЕ 22 МЕСЯЦА, ПОЛУЧАВШИХ КОМПЛЕКСНЫЙ ФИТОАДАПТОГЕН В РАЗНЫХ РЕЖИМАХ

  • ХАРАКТЕР ШЕРСТНОГО ПОКРОВА МЫШЕЙ СВА В ВОЗРАСТЕ 22 МЕСЯЦА, ПОЛУЧАВШИХ ФИТОМИКС-40 В РАЗНЫХ РЕЖИМАХ

  • ВНЕШНИЙ ВИД САМЦА КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЫ МЫШЕЙ ВЫСОКОРАКОВОЙ ЛИНИИ СВА В ВОЗРАСТЕ 24 МЕСЯЦА С ПРИЗНАКАМИ АЛЛОПЕЦИИ И ОБЕСЦВЕЧИВАНИЯ ШЕРСТИ

  • ВНЕШНИЙ ВИД СТАРОГО САМЦА МЫШЕЙ ВЫСОКОРАКОВОЙ ЛИНИИ СВА ИЗ ТРЕТЬЕЙ ГРУППЫ В ПОЗДНЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ (В ВОЗРАСТЕ 36 МЕСЯЦЕВ), КОТОРЫЙ С ШЕСТИМЕСЯЧНОГО ВОЗРАСТА ПОЛУЧАЛ ФМ-40

  • У контрольных животных вид шёрстного покрова оказался полноценным относительно. У некоторых мышей констатировали седую шерсть, признаки аллопеции и снижения веса.

    Вместе с тем все экспериментальные животные из второй и третьей групп были покрыты полноценным шёрстным покровом без каких-либо дефектов, вопреки тому, что мыши опытных групп жили более длительно.

    Следовательно, удовлетворительная двигательная активность опытных животных обеих групп без признаков анорексии и аллопеции согласуется с лучшей выживаемостью высокогепатомных мышей линии СВА, принимавших Фитомикс-40 при разных схемах введения.

  • Изученная модель спонтанного канцерогенеза у мышей с учетом коррекции показателей лейкоцитарных интегринов, снижения частоты и размеров опухолей, их морфологических особенностей, а также повышения продолжительности и качества жизни экспериментальных животных может использоваться для исследования иммуномодуляторов, перспективных для профилактики и комплексной терапии онкологических заболеваний.

    В работе изучена значимость коррекции экспрессии лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Mac-1 на эффекторах иммунитета, которая может обеспечиваться снижением сывороточного уровня ИЛ-6, ИЛ-10 и способствовать лимфоцитарной инфильтрации опухолевого очага, участвуя в подавлении ускользания опухоли от иммунологического надзора, усилении противоопухолевых реакций, а также в повышении продолжительности и качества жизни высокораковых мышей.

  • ВЫВОДЫ

    1.У мышей-самцов выокораковой линии СВА снижена экспрессия молекул лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Mac-1 на лимфоцитах крови, а также повышен уровень интерлейкина-6 и интерлейкина-10 в сыворотке крови.

    2.У 100% высокораковых мышей линии СВА в возрасте 22-х месяцев выявлены множественные умеренно- и низкодифференцированные трабекулярные и трабекулярно-ацинарные гепатокрциномы.

    3.Пероральное введение комплексного фитоадаптогена мышам линии СВА в профилактическом режиме, включая завершающий период дифференцирки ткани печени, усиливает экспрессию молекул лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Mac-1, подавляет сывороточный уровень интерлейкина-6 и интерлейкина-10, а также снижает частоту возникновения, количество и размеры гепатокарцином.

    4.Введение комплексного фитоадаптогена мышам линии СВА долговременно в лечебном режиме способствует коррекции показателей лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Mac-1, интерлейкинов ИЛ-6 и -10, уменьшает частоту возникновения и размеры гепатокарцином.

    5.При воздействии комплексного фитоадаптогена в профилатическом и лечебном режиме выявлена лимфоцитарная инфильтрация опухолевых очагов.

    6.Профилактическое и лечебное применение комплексного фитоадаптогена при спонтанном канцерогенезе увеличивает выживаемость экспериментальных мышей на три и шесть месяцев соответственно по сравнению с контрольными животными.

    7.Лучшую выживаемость высокораковых мышей линии СВА, принимавших комплексный фитоадаптоген при разных схемах введения, сопровождает удовлетворительное соматическое состояние опытных животных.