Презентация Бочарова Е.В.



  • Коррекция патогенетических механизмов болезни Паркинсона в комплексной терапии с применением фитоадаптогена (клинико-экспериментальное исследование)


  • Актуальность проблемы.
    Болезнь Паркинсона является одни из частых нейропатологических заболеваний у людей пожилого возраста. Распространенность БП достигает 7 % у лиц старше 60 лет.

    Болезнь Паркинсона представляет собой хроническое нейродегенеративное заболевание, приводящее к тяжелой инвалидности. Ключевым звеном патогенеза БП является селективное повреждение дофаминергических нейронов в черной субстации, что приводит к снижению уровня дофамина в стриатуме.

    Среди причин смерти нейронов, важную роль играет образование свободных радикалов и оксидативный стресс, нарушение дыхательной функции митохондрий и энергетический дефицит, активация НМДА-глутаматных рецепторов и др.

    Вместе с тем следует учесть, что нарушение взаиморегуляции нервной, эндокринной и иммунной системы создает риск и обеспечивает развитие заболевания. Действительно, у пациентов с БП выявлены более глубокие нарушения иммунной и эндокринных систем по сравнению с возрастным контролем: уровень плазменного кортизола завышен в большей степени, что обусловливает более выраженное отрицательное влияние глюкокортикоидов на организм, в частности на иммунную систему.

    Основным методом лечения болезни Паркинсона остается заместительная терапия в виде предшественника дофамина L-ДОФА. Однако она является симптоматической и не устраняет главной причины заболевания. Более того, длительное применение леводопа-содержащих препаратов вызывает тяжелые побочные эффекты (дискинезий, деменций, галлюцинаций и др.).

    Многофакторный патогенез БП обусловливает необходимость комплексной патогенетической терапии (КПТ) этого заболевания. Принцип КПТ, определенный Г.Н. Крыжановским (1986, 1997), заключается в сочетанном воздействии лечебными средствами на различные звенья патологической системы.

  • Несмотря на достижения в лечении болезни Паркинсона, его успехи ограничиваются отсутствием эффективных нейропротекторных препаратов. В связи с этим наше внимание привлекли фитоадаптогены такие как женьшень, элеутерококк и др. Известно, что они обладают нейропротекторными и антиоксидантными свойствами. Показано, например, что сапонины и гинзенозиды из женьшеня, блокируют NMDA-рецепторы, снижают активность апоптотического фермента каспазы-3, содержание внутриклеточного Са2+ и нейротоксичность глутамата, ингибируют чрезмерное образование свободных радикалов и NO, защищают дофаминергические нейроны от повреждения. Действительно, распространенность БП в Китае в 5 раз ниже по сравнению с США, что связывают с повышенным потреблением женьшеня и других адаптогенов китайским населением.

  • Фитомикс-40 (ФМ-40) – отечественный комплексный растительный препарат, содержащий фитоадаптогены. Сертифицирован в качестве парафармацевтика. В клинических исследованиях у пациентов пожилого возраста Фитомикс-40, показал выраженные антиоксидантные, антимутагенные, иммуно-, и гормономодулирующие свойства.

    Цель исследования – изучение влияние комплексного фитоадаптогена на патогенетические механизмы паркинсонизма и определение его возможностей повышения эффективности комплексной патогенетической терапии.

  • Задачи исследования:

    1.Изучение влияния фитоадаптогена ФМ-40 на развитие МФТП-индуцированного паркинсонического синдрома у мышей линии С57Bl/6.

    2.Исследование воздействия фитоадаптогена ФМ-40 на содержание малонового диальдегида, уровень дофамина, его метаболитов (ДОФУК, ГВК) и серотонина в стриатуме мышей линии С57BL/6 с МФТП-индуцированным паркинсоническим синдромом.

    3.Проведение клинического обследования пациентов с БП.

    4.Определение показателей иммунного, антиоксидантного статусов, уровня гормона кортизола, а также содержания цитокинов ИЛ-6, ФНО-α, ИФН-γ у пациентов с БП.

    5.Сравнительная оценка клинических и иммунобиологических показателей в динамике стандартной антипаркинсонической терапии БП без использования ФМ-40, а также на фоне приема препарата.

    6.Оценка перспективности использования ФМ-40 в комплексной патогенетической терапии БП.

  • Паркинсонический синдром вызывали у мышей линии C57BL/6 многократным внутрибрюшинным введением нейротоксина МФТП в дозе 20 мг/кг дважды в сутки с интервалом 12 ч в течение 10 сут. Фитомикс-40 применялся перорально в 2 и 10% концентрации в питьевой воде.

    Показано, что пероральное введение Фитомикса-40 в 10%-й концентрации достоверно ослабляло развитие гипокинезии животных как на 5-е, так и на 10-е сутки после введения МФТП. 2% раствор Фитомикса-40 препятствовал снижению двигательной активноси мышей лишь на 5-е сутки.

    Влияние Фитомикса-40 на двигательную активность мышей при МФТП-индуцированном паркинсоническом синдроме

    1 – NaCl; 2 – МФТП; 3 – МФТП + этанол; 4 – МФТП + 2% ФМ-40; 5 – МФТП + 10% ФМ-40 (n=8-10)

  • Высокая концентрация Фитомикса-40 снизила ригидность мышей как на 5, так на 10-е сутки от начала введения нейротоксина. ФМ-40 в 2%-ной концентрации подавлял ригидность животных только до 5-го дня введения МФТП.

    Влияние Фитомикса-40 на ригидность мышей при МФТП-индуцированном паркинсоническом синдроме

    1 – МФТП; 2 – МФТП + этанол; 3 – МФТП + 2% ФМ-40; 4 – МФТП + 10% ФМ-40 (n=8-10)

  • 10%-й раствор Фитомикса-40 увеличивал уровень дофамина в 2,3 раза, а содержание ДОФУК (показатель внутриклеточного метаболизма дофамина) и ГВК (показатель постсинаптической трансформации дофамина) возросли соответственно в 2,2 и 3 раза по сравнению с МФТП-контролем. Более того, 10% раствор Фитомикса-40 снизил содержание серотонина в стриатуме. 2-х процентная концентрация Фитомикса-40 не влияла на уровень нейромедиаторов и их метаболитов.

    Влияние Фитомикс-40 на уровень дофамина, его метаболитов и серотонина в стриатуме мышей с МФТП-индуцированным паркинсоническим синдромом

    1 – NaCl; 2 – МФТП; 3 – МФТП + этанол; 4 – МФТП + 2% ФМ-40; 5 – МФТП + 10% ФМ-40

  • Было показано, что как низкая, так и высокая концентрации Фитомикса-40 подавляли уровень МДА в стриатуме мышей практически до нормы.

    Влияние ФМ-40 на уровень малонового диальдегида (МДА) в стриатуме мышей с МФТП-индуцированным паркинсоническим синдромом

    1 – NaCl; 2 - MФТП + NaCl; 3 - MФТП + этанол; 4 - MФТП + 2% ФM-40; 5 - MФТП+10% ФМ-40

  • In vitro ФМ-40 также проявил антиоксидантную активность. В этих опытах ПОЛ индуцировали аскорбатом 2-х валетного железа в гомогенате головного мозга мышей. При этом уровень МДА возрастал почти в 5 раз. Под воздействием ФМ-40 через 40 минут уровень МДА снижался практического до контроля.

    Влияние Фитомикс-40 на уровень МДА при Fe2+ (10-5M)-аскорбат (2.10-4М)-зависимом ПОЛ in vitro

    1 – t инкубации гомогената головного мозга мышей 0 мин 2 - t инкубации 40 мин

  • Вместе с тем выявлено, что инъекции нейротоксина МФТП увеличивают активность фермента каспазы-3 и степень фрагментации ДНК (след. слайд) в клетках черной субстанции головного мозга мышей, что предполагает участие апоптоза в клеточной гибели нейронов. Введение Фитомикса-40 способствовало снижению активности каспазы 3 и степени фрагментации ДНК. Полученные результаты свидетельствует о подавлении с помощью Фитомикса-40 апоптической гибели нервных клеток. Таким образом, есть основания предполагать, что Фитомикс-40 обладает нейропротекторной активностью, способствуя замедлению процесса нейродегенерации при паркинсонизме. Наряду с этим, изучение механизмов воздействия комплексных фитоадаптогенов, замедляющих нейродегенерацию, является актуальным для геронтологии и гериатрии.

    Эффект Фитомикса-40 на активность каспазы-3 в черной субстанции мышей с МФТП-индуцированным паркинсоническим синдромом

  • Эффект Фитомикса-40 на степень фрагментации ДНК в черной субстанции головного мозга у мышей с МФТП-индуцированным паркинсонизмом

  • Антиоксидантное действие ФМ-40 может быть связано наличием в его составе флавоноидов, сапонинов, витаминов А, Е, С, способных модулировать активность антиоксидантных ферментов.

    Полученные экспериментальные данные явились основанием для клинических исследований. С учетом экспериментальных данных была определена суточная доза приема Фитомикса-40 для человека.

    Изучение эффективности Фитомикса-40 в комплексной терапии проводили у больных с идиопатической формой болезни Паркинсона. В исследовании приняли участие 32 пациента в возрасте от 43 до 78 лет (средний возраст 60,8±2 лет), из них 10 мужчин и 22 женщины.

    Продолжительность болезни составила в среднем 5,2±0,7 лет (минимальная длительность- 1 год, максимальная длительность – 21 год). Дрожательно-ригидная форма заболевания присутствовала у 16 человек, ригидно-дрожательная – у 15, 1 человек был болен акинетико-ригидной формой.

    Все пациенты принимали консервативное антипаркинсоническое лечение, в состав которого входили L-ДОФА-содержащие препараты (“Наком”, “Синемет CR”, “Мадопар”), а также препараты дополнительной терапии (ПК-Мерц, Мирапекс, и др.).

    За пациентами вели клиническое и лабораторное наблюдение в течение 3 месяцев. Затем больным в комплексную терапию включали ФМ-40 в течение 3-х месяцев в дозе 45 мл/сут.

    Для объективной оценки степени выраженности неврологических нарушений использовали унифицированную рейтинговую шкалу болезни Паркинсона (Unified Parkinson`s Disease Rating Scale, UPDRS).

  • Суммарный балл раздела II шкалы UPDRS, характеризующего нарушения повседневной активности пациентов, на фоне ФМ-40 достоверно снижался на 4,6 балла Суммарный балл раздела III, который отражает двигательные нарушения пациентов, под действием ФМ-40 также достоверно снижался на 5. балов. При этом выраженность тремора и ригидности также достоверно уменьшились. Выраженность брадикинезии обнаружила тенденцию к снижению.

    У пациентов нормализовалась речь, письмо, походка. Субъективно они отмечали снижение раздражительности, повышение общего тонуса и работоспособности, улучшение сна. ФМ-40 не вызывал побочных явлений. Таким образом, использование ФМ-40 на фоне стандартной антипаркинсонической терапии оказало положительный клинический эффект, улучшая качество жизни пациентов, что позволило снизить дозы леводопасодержащих препаратов.

    Оценка изменения клинических симптомов у пациентов с болезнью Паркинсона в результате курсового приема Фитомикса-40 (по шкале UPDRS)

  • Оценка изменения клинических симптомов у пациентов с болезнью Паркинсона в результате курсового приема Фитомикса-40 (по шкале UPDRS)

  • Содержание МДА в крови больных при первичном обследовании в 1,6 раза превышало норму и сохранялось на этом уровне, несмотря на проведение стандартной антипаркинсонической терапии. Вместе с тем отмечена сниженная активность супероксиддисмутазы. Выявленные у больных до приема ФМ-40 изменения показателей антиоксидантного статуса в периферической крови согласуются с данными литературы о недостаточности антиоксидантных систем нейрона при БП. Применение ФМ-40 приводило к достоверному снижению уровня МДА в крови больных. При этом активизировались СОД, каталаза и глутатионовая антипероксидная система. Фитомикс-40 в клинике проявил также антиоксидантную активность.

    Изменение показателей антиоксидантного статуса у пациентов с болезнью Паркинсона в результате курсового приема Фитомикса-40

  • У пациентов с БП обнаружены нарушения следующих показателей иммунного статуса. Снижено число Т-, Т-хелперов, В-лимфоцитов, хелперно-супрессорное соотношение. По сравнению с нормой и с пациентами соответствующей возрастной группы без неврологических нарушений. Вместе с тем повышено число макрофагов, натуральных киллеров, а также уровень клеток с экспрессией рецептора к ИЛ-2 и антигена, опосредующего апоптоз. Включение Фитомикса-40 в комплексную терапию приводило к коррекции обозначенных показателей иммунного статуса.

    Изменение показателей иммунного статуса у пациентов с болезнью Паркинсона в результате курсового приема Фитомикса-40

  • Параллельно этому под влиянием ФМ-40 снижалось содержание ИЛ-6, ФНО-α и увеличилось сожержание ИФН-γ. Изменение иммунологического статуса у пациентов может быть связано с нарушением дофаминергической регуляции иммунной системы, а также с выявленными при БП процессами воспаления в микроглии головного мозга. Применение ФМ-40 устраняло иммунодефицит в отношении Т- и В-лимфоцитов, а также подавляло негативную активацию иммунитета, проявляя иммуномодулирующую, в том числе интерфероногенную и противовоспалительную активность препарата.

    Изменение концентрации цитокинов в периферической крови у пациентов с болезнью Паркинсона в результате курсового приема Фитомикса-40

  • У пациентов с БП уровень кортизола в крови был выше как физиологической нормы, так и соответствующего возрастного контроля. Фитомикс-40 снижал значение этого показателя практически до нормы. Повышенный уровень кортизола у пациентов, связанный с процессами старения и токсичностью левадопосодержащих препаратов, согласуется с иммунодепрессией в отношении Т- и В-лимфоцитов. ФМ-40, регулируя содержание кортизола, снижал иммунодепрессивное действие глюкокортикоидов и приводил к нормализации иммунологических показателей.

    Влияние Фитомикса-40 на уровень кортизола в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона

  • В заключение следует отметить, что в результате клинико-экспериментальных исследований установлен антипаркинсонический эффект фитоадаптогенного препарата. Имеются основания полагать, что Фитомикс-40 оказывает нейропротекторный эффект, замедляя темпы нейродегенерации. Вероятно, Фитомикс-40 восстанавливает дофаминсинтезирующую функцию обратимо поврежденных нейронов и таким образом повышает эффективность комплексной патогенетической терапии. Комплексный характер действия ФМ-40, обеспечивая сочетанное влияние на патогенетические механизмы и коррекцию разных звеньев патологической системы при БП, вероятно, позволяет потенцировать лечебный эффект и снизить побочное действие используемой терапии, что соответствует принципу КПТ.